从您听到的关于2020年COVID-19的许多事情中,有一件事是用于检测某人是否感染该病毒的试验,即著名的RT-PCR试验或仅PCR。
您肯定已经从医学专家或新闻中听说过这种检测方法。PCR检测用于检测人体内是否存在病毒。
RT-PCR检测不是唯一能检测病毒的方法,但与其他方法相比,它是最准确、最可靠的方法。另一种检测方法是传统的血清学检测,该方法可检测血样中的特异性抗体水平。
RT-PCR中的字母代表 反转录聚合酶链反应几十年来,科学家们一直用它来生产多份遗传物质。
换句话说,在这种情况下,更多的SARS-CoV-2遗传物质被用作指纹,以证明从患者的鼻子、耳朵或唾液中采集的样本中存在病毒。如果样本中隐藏有任何病毒,即使数量很少,也能通过复制粘贴循环检测出来。这就是RT-PCR检测如此可靠的原因。
测试 是一种在温度周期内基本上有两个步骤的方法,对DNA或RNA等遗传物质进行复制粘贴。
测试要求 热循环机 其精确 温度和时间控制.通过多次温度循环,病毒遗传物质将增加。下图是一个温度循环的示例。
该方法需要两种主要的酶,即逆转录酶(这就是标题中 "RT "的原因)和DNA聚合酶。每种酶都有各自的作用阶段和功能。在上图中,循环的黄色阶段是RT起作用的阶段,红色阶段是DNA聚合酶起作用的阶段。
第一种酶从RNA病毒中提取互补的DNA链,让第二种酶从新提取的DNA链中进行复制粘贴,从而增加遗传物质的数量。这种扩增使得对遗传物质进行定性和/或操作成为可能。
在所有这些过程中,酶需要一种叫做引物的小分子(或大分子)的帮助。引物的作用是指示酶开始延长链的位置,没有引物,DNA聚合酶的复制粘贴过程就不会开始。
引物可以选择随机或特定形状。在这种情况下,了解vírus的基因图谱非常重要,这样可以使用特定的引物来提高结果的效率和可靠性。
如果您和我们一样好奇,想了解RT-PCR的更多细节,您可以查看更多细节 这篇科学文章 就在这里 但本质上,这里有做测试所需的一切:
病毒遗传物质RNA
逆转录酶和DNA聚合酶
PRIMERS
核苷三磷酸酯
和荧光报告染料:
为了解样品是否被COVID-19病毒污染,可将荧光报告染料检测与RT-PCR检测结合使用。该检测是基于样品是否存在荧光信号。如果没有荧光信号,则可判定为阴性或假阴性。如果出现强烈的荧光信号,则不仅可判定vírus阳性,还可判定为晚期疾病。
混合所有配料并将其放入热循环机中。
下图显示了检测的第一步。RT酶制作样本中病毒遗传物质的第一个拷贝。下面是RT-PCR方法的第二步。引物指示起始位置,DNA聚合酶通过酶促反应开始延伸DNA链。
最后,这张照片是SARS-CoV-2病毒的电子显微图像,可以清楚地看到病毒的结构。是不是很美?
该测试非常复杂,并不像看起来那么简单,但我敢打赌,有了信息图表,就更容易理解它是如何工作的,对吗?
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参考资料
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新型冠状病毒SARS-CoV-2 | 该透射电子迷... | Flickr.Disponível em:.Acesso em: 23 jul. 2020.
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